بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

پایان نامه سرطان پستان
طراحی روش RT – PCR
تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2
شناسایی تومورهای erbB2
شناسایی تومورهای erbB2 با ایمونوهیستوشیمی (IHC)

رفتن به سایت اصلی

رساله دکترای رشته پزشکی

 

بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

 

 

 

چکیده:

سرطان پستان از شایع ترین سرطان های زنان است که سبب مرگ زنان زیادی می شود. موتاسیون های بسیاری نظیر ازدیاد آنکوژن ها و یا حذف ژن های سرکوبگر تومور در این سرطان شناسایی شده اند؛ در بین آنکوژن ها، erb-B2 که به خانواده EGFR (گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی) تعلق دارد در 30%-25% تومورهای پستان با منشاء سلول های داکتال ازدیاد پیدا می کند. (80% سرطان های پستان منشا داکتال دارند.)در بیمارانی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده بیماری می تواند تا حدی با استفاده از یک آنتی بادی مونوکلنال انسانی شده علیه محصول پروتئینی ژن erb-B2 به نام هرسپتین مهار شود.از این رو شناسایی تومورها یی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده اهمیت دارد.روش روتین در شناسایی این تومورها ایمونوهیستوشیمی (IHC) می باشد.

 

در این مطالعه 50 نمونه از بیمارستان دی جمع آوری شد که بر اساس نتایج IHC، 32% نمونه ها ازدیاد آنکوژن erb-B2 را نشان می دادند.جهت مقایسه RT-PCR و IHC، RNA این نمونه ها استخراج شد و RT-PCR برای آن ها انجام شد که در آن دو جفت پرایمر طراحی شده به طور همزمان ژن erb-B2 را به همراه ژن بتاگلوبین به عنوان کنترل داخلی تکثیر می کردند؛ سپس محصولات RT-PCR بر روی ژل آگاروز برده شدند و شدت باند های مربوط به erb-B2 و کنترل داخلی با یکدیگر مقایسه گردید. در نهایت از مقایسه نتایج حاصله از RT-PCR با نتایج IHC مشخص شد که بازده RT-PCR در تشخیص نمونه های با درجه IHC 3+، 100% و در مورد نمونه های 2+، نیز 100% می باشد.   همچنین آزمایش PCR بر روی DNA استخراج شده از بافت توموری و DNA نرمال استخراج شده از بافت فرد سالم انجام گرفت که نتایج مربوط به این آزمایش نیز نتایج بدست آمده از RT-PCR را تایید می کردند. 

 

 

کلمات کلیدی:

سرطان

داکتال

آنکوژن ها

موتاسیون

سرطان پستان

سرطان های زنان

مقایسه RT-PCR و IHC، RNA

 

 

مقدمه:

 در پستان نرمال، داکتها و لوبولها بوسیله دو نوع سلول فرش می شوند یک دسته سلول های مسطح که یک لایه ناپیوسته از سلول های قابل انقباض حاوی میوفیلامان ها هستند (سلول های میواپی تلیال  ) و روی غشای پایه قرار دارند . این سلول ها در خروج شیر در طی دوره شیر سازی همکاری می کنند و نقش مهمی در حفظ ساختار و عملکرد نرمال لوبول ها و غشای پایه دارند (86). لایه دومی از سلول‌های پوششی کف لومن را فرش کرده است ( سلول های لومینال   ). 

 

داکت های انتهایی و لوبولها شیرتولید می کنند ولی سلول های بخشهای دیگر داکت، در تولید شیر نقشی ندارند.منشأ سلول های لومینال و اپیتلیال ، سلول های بنیادی واقع در ترمینال داکت ها در نظر گرفته  می شود(6). بخش اصلی بستر پستان از بافت پیوندی فیبروس متراکم مخلوط با بافت چربی تشکیل شده است که همان  بستره بین لوبولی  است. لوبولها بوسیله یک بستره ظریف احاطه شده اند که بافت ویژه پستان است و خصوصیات پاسخ دهنده به هورمون دارد و دارای تعدادی  لنفوسیت می باشد  (85).  

 

 

 

فهرست مطالب

چکیده: 1

فصل اول:مقدمه 5

1-1- غدد پستانی 6

1-1-1- ساختار پستان نرمال 6

شکل (1-1 )- ساختار پستان نرمال (55) 7

1-1-2- تغییرات پستان در چرخه زندگی 8

1-2 -کارسینومای پستان 10

1-2-1-کارسینوما 10

1-2-2- ریسک فاکتورها 12

1-2-3- سبب شناسی سرطان پستان 16

1-2-5- سرطان پستان غیر وراثتی 19

1-2-5-1-2- تومور ساپرسورها 21

1-2-5-1-4- مسیرهای بقای سلولی و مرگ سلولی 23

1-2-5-1-4-1- تلومراز 23

1-2-5-1-4-2- ژن های وابسته به آپوپتوز 24

1-2-6-1- طبقه بندی کارسینوماهای پستان بر اساس مطالعات میکرواری (از لحاظ ملکولی) 26

1-2-6-1-1-کارسینوماهای ER- مثبت 26

1-2-6-1-2-کارسینومای های ER- منفی 26

1-2-6-1-3-کارسینوماهای  Basal-like 27

1-2-6-1-4-کارسینوماهای HER2/neu- مثبت 27

شکل 1-3- نمای شماتیک خانواده HER (90) 28

1-2-7- طبقه بندی کارسینوماهای پستان از لحاظ بافت شناسی 31

1-2-7-1- کارسینوما های در جا و تهاجمی(شکل 1-6 ) 31

شکل (1-5) – کارسینوماهای درجا و تهاجمی (85) 32

 

فصل دوم:مروری بر مطالعات انجام شده 34

2-1- تکنیک های سنجش HER2/neu 35

2-1-1- ایمونوهیستوشیمی (IHC) 35

2-1-2- ساترن و اسلات بلات 37

2-1-3-تکنیک FISH 37

2-1-4- تکنیک CISH ) (Chromogenic in situ hybridization 38

2-1-5- تکنیک ( Enzime – linked immunosorbent assay ) ELISA 38

2-2- وضعیت HER2 و پیشگویی پاسخ به درمان با هرسپتین 40

2-3- HER2/neu فسفریله به عنوان یک مارکرپروگنوستیک و پیش گویی بالقوه 41

2-4- سنجش بخش خارج سلولی HER2 در جریان خون به عنوان تومور مارکر 41

2-5- خلاصه 42

2-2- هدف 43

 

فصل سوم:مواد و روشها 44

مواد و روشها 44

3-1- استخراج RNA ی كل از بافت 45

3-2- بررسی كمی و كیفی RNA ی استخراج شده 50

3-2-1- UV اسپكتروفتومتری 50

3-2-2- الكتروفورز ژل آگارز (106) 52

طرز تهیه محلول ها و بافرهای مورد نیاز در الكتروفورز : 53

محلول اتیدیوم بروماید (10 mg /ml) 54

مواد و وسایل لازم 55

جدول 3-1 – رابطه درصد ژل آگارژ با اندازه مولكول DNA 58

3-3 تیمار RNAی استخراج شده با آنزیم DNase [149] 58

طرز تهیه مخلوط dNTP از هر یك از نوكلئوتیدها 60

3-5- واكنش PCR [2] 63

3-5-1 طراحی پرایمر: 63

3-5-2- آماده سازی پرایمرهای PCR [2] 66

3-7- استخراج DNA از بافت پستانداران با استفاده از Accuprep Genomic DNA Extraction kit (Bioneer) 70

3-7-1- سنجش غلظت DNA 71

3-9- ایمنوهیستوشیمی Immunohistochemical (IHC) Techniques 73

 

فصل چهارم:بحث و نتایج 76

بحث و نتایج 76

4-1- نتایج 77

4-1-1- تعیین کیفیت و کمیت RNA ی استخراجی 77

4-1-2- بهینه سازی واکنش PCR 78

4-1-3-  RT – PCR 80

4-2-  بحث و پیشنهادات 84

4-2-1- بحث 84

4-2-2- علت انتخاب RT- PCR 85

4-2-4- پیشنهادات 87

منابع 88

 

 

 

  • دانلود پاورپوینت معماری های تک و اکوتک

    دانلود پاورپوینت معماری های تک و اکوتک پاورپوینت معماری هایتک و اکوتک دانلود رایگان پاورپوینت معماری هایتک و اکوتک دانلود پاورپوینت معماری هایتک و اکوتک پاورپوینت تحلیل معماری هایتک و اکوتک پاورپوینت سبک های معماری رفتن به سايت اصلي دانلود…

  • بررسی تنصیف دارایی شوهر، اجرت المثل و نحله به عنوان آثار مالی انحلال نکاح

    بررسی تنصیف دارایی شوهر، اجرت المثل و نحله به عنوان آثار مالی انحلال نکاح نحله پس از انحلال نکاح آثار مالی انحلال نکاح اجرت المثل پس از انحلال نکاح شرایط و ملاک های استحقاق نحله شرایط استحقاق اجرت المثل تنصیف…

  • سنجش تاثیر عوامل موثر در ارزش ویژه برند سبز محصولات الکترونیکی در میان مصرف کنندگان

    سنجش تاثیر عوامل موثر در ارزش ویژه برند سبز محصولات الکترونیکی در میان مصرف کنندگان کیفیت درک شده برند ارزش درک شده برند سبز پایان نامه ارزش ویژه برند سبز ابعاد ارزش ویژه برند سبز عوامل موثر در ارزش ویژه…

  • پاورپوینت اصول ومفاهيم شی گرا

    پاورپوینت اصول ومفاهيم شی گرا دانلود پاورپوینت مفاهيم شیء گرایی پاورپوینت شی گرایی پاورپوینت درباره شی گرایی پاورپوینت اصول اولیه شی گرایی پاورپوینت شی گرایی چیست؟ پاورپوینت شی گرایی یعنی چه؟ رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت اصول ومفاهيم شی گرا…

  • پایان نامه کارشناسی صنایع غذایی با عنوان ماکارونی غنی شده

    پایان نامه کارشناسی صنایع غذایی با عنوان ماکارونی غنی شده ماکارونی غنی شده غنی سازی ماکارونی تاریخچه ماکارونی در ایران و جهان دانلود پایان نامه ماکارونی دانلود پایان نامه غنی سازی ماکارونی دانلود پایان نامه ماکارونی غنی شده پایان نامه…

  • مبانی نظری سنجش مدیریت دانش در دانشگاه

    مبانی نظری سنجش مدیریت دانش در دانشگاه مبانی نظری مدیریت دانش مبانی نظری سنجش مدیریت دانش مبانی نظری سنجش مدیریت دانش در دانشگاه پیشینه تحقیق مدیریت دانش پیشینه تحقیق سنجش مدیریت دانش پیشینه تحقیق سنجش مدیریت دانش در دانشگاه مبانی…

  • مبانی نظری ارزیابی عملکرد سازمان با روش ارزیابی متوازن و اولویت بندی پروژه های آن با توسعه عملکرد کیفیت

    مبانی نظری ارزیابی عملکرد سازمان با روش ارزیابی متوازن و اولویت بندی پروژه های آن با توسعه عملکرد کیفیت ارزیابی عملکرد شهرداری اصفهان ارزیابی عملکرد شهرداری ها شاخص های ارزیابی عملکرد شهرداری ها ارزیابی عملکرد با کارت امتیازی متوازن کاربرد…

  • مقاله رشته حقوق با عنوان امضاء الکترونیکی و قوانین حاکم بر آن

    مقاله رشته حقوق با عنوان امضاء الکترونیکی و قوانین حاکم بر آن رمز نگاری امضا الکترونیکی تجارت الکترونیکی دانلود مقاله رشته حقوق با عنوان امضاء الکترونیکی و قوانین حاکم بر آن خرید مقالات حقوقی سیستم همکاری در فروش فایل فایلینا…

  • قاچاق انسان در پرتو اسناد بین المللی

    قاچاق انسان در پرتو اسناد بین المللی قاچاق انسان تحقیق قاچاق انسان تحقیق قاچاق زنان تحقیق درباره قاچاق انسان تحقیق پدیده قاچاق انسان قاچاق انسان در كنوانسیون پالرمو قاچاق انسان در مقاوله نامه بین المللی قاچاق انسان در قرارداد بین…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق استراتژی های منابع انسانی

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق استراتژی های منابع انسانی مبانی نظری استراتژی های منابع انسانی دانلود مبانی نظری استراتژی های منابع انسانی دانلود پیشینه تحقیق استراتژی های منابع انسانی پیشینه تحقیق استراتژی های منابع انسانی ادبیات نظری استراتژی های منابع…

  • دانلود پاورپوینت مدیریت نیروی انسانی و مدیریت دانش

    دانلود پاورپوینت مدیریت نیروی انسانی و مدیریت دانش پاورپوینت مدیریت منابع انسانی و مدیریت دانش پاورپوینت مدیریت نیروی انسانی دانشگاه ایران پاورپوینت ارتباط مدیریت منابع انسانی و مدیریت دانش پاورپوینت مدیریت دانش رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت مدیریت نیروی…

  • پاورپوینت بررسی سیستم حمل و نقل کشور مالزی

    پاورپوینت بررسی سیستم حمل و نقل کشور مالزی پاورپوینت حمل و نقل پاورپوینت حمل و نقل مالزی دانلود پاورپوینت بررسی حمل و نقل مالزی پاورپوینت درباره بررسی حمل و نقل مالزی رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت بررسی سیستم حمل…

  • دانلود تحقیق در مورد خودکارآمدی docx

    دانلود تحقیق در مورد خودکارآمدی docx رفتن به سايت اصلي هدف از این تحقیق بررسی خودکارآمدی با فرمت docx در قالب 30 صفحه ورد بصورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش می باشد       فهرست مطالب مقدمه20…

  • بررسی درخت بید و آفات آن

    بررسی درخت بید و آفات آن درخت بید گیاهپزشكی آفات مهم درختان بید تشخیص بیماری‌های گیاهپزشكی دانلود کارآموزی بررسی درخت بید و آفات آن دانلود گزارش کارآموزی کشاورزی دانلود کارآموزی کشاورزی دانلود کارآموزی مهندسی کشاورزی رفتن به سایت اصلی دانلود…

  • پاورپوینت درباره سن نوجوانی

    پاورپوینت درباره سن نوجوانی رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت درباره سن نوجوانی جهت رشته ی روان شناسی در قالب 22 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش       ویژگی های…

  • پاورپوینت روابط آب و خاک و گياه

    پاورپوینت روابط آب و خاک و گياه دانلود پاور پوینت روابط آب و خاک و گياه تحقیق در مورد پاور پوینت روابط آب و خاک و گياه پاور پوینت روابط آب و خاک و گياه و انواع آن روابط آب…

  • بررسی افزایش مطالبات معوق انواع بانکها و ارائه راه حلهای مناسب

    بررسی افزایش مطالبات معوق انواع بانکها و ارائه راه حلهای مناسب پایان نامه مطالبات معوق عوامل موثر در ایجاد مطالبات معوق راهکارهای مناسب برای وصول مطالبات بانکی مطالبات معوق بانکی علل ایجاد مطالبات معوق بانکی مطالبات معوق بانکی از نگاه…

  • مفهوم و مبانی جرم انگاری پولشویی و سیر تحول تاریخی آن

    مفهوم و مبانی جرم انگاری پولشویی و سیر تحول تاریخی آن کلمات کلیدی : پایان نامه پولشویی مبانی جرم انگاری جرم پولشویی مبانی فقهی جرم انگاری جرم پولشویی پایان نامه پولشویی در حقوق ایران مبانی اقتصادی جرم انگاری جرم پولشویی…

  • پاورپوینت بررسی و شناخت بيماران دچار اختلالات سيستم اسكلتی عضلانی

    پاورپوینت بررسی و شناخت بيماران دچار اختلالات سيستم اسكلتی عضلانی رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت بررسی و شناخت بيماران دچار اختلالات سيستم اسكلتی عضلانی جهت رشته ی پزشکی در قالب 44 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل…

  • پاورپوینت میکروب بیماری سل

    پاورپوینت میکروب بیماری سل رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت میکروب سل جهت رشته ی پزشکی در قالب 35 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش         تا كنون يک سوم …

  • پاورپوینت کتاب روان سنجی از حمزه گنجی 

    پاورپوینت کتاب روان سنجی از حمزه گنجی  پاورپوینت روان سنجی چیست پاورپوینت روان سنجی پرسشنامه پاورپوینت روان سنجی سینا پاورپوینت روان سنجی کاربردی پاورپوینت روان سنجی پاورپوینت تست روانسنجی mmpi پاورپوینت کتاب روان سنجی پاورپوینت کتاب از حمزه گنجی  پاورپوینت…

  • پاورپوینت فصل اول کتاب مبانی مدیریت دولتی تألیف دکتر علی اصغر پورعزت با موضوع فهم اداره و حکمرانی

    پاورپوینت فصل اول کتاب مبانی مدیریت دولتی تألیف دکتر علی اصغر پورعزت با موضوع فهم اداره و حکمرانی کلمات کلیدی : دانلود رایگان پاورپوینت فصل اول کتاب مبانی مدیریت دولتی تألیف علی اصغر پورعزت با موضوع فهم اداره و حکمرانی…

  • بینش و جهان بینی شاعران معاصر نسبت به مسئله نماز و نیایش

    بینش و جهان بینی شاعران معاصر نسبت به مسئله نماز و نیایش نماز و نیایش در شعر تحلیل آداب نماز و نیایش نماز و نیایش در اندیشه شاعران آداب نماز و نیایش به روايت شعر فارسي نماز و نیایش در…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق داده کاوی توزیع شده 43 صفحه

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق داده کاوی توزیع شده 43 صفحه کلمات کلیدی : فصل دوم پایان نامه داده کاوی توزیع شده مبانی نظری داده کاوی توزیع شده پیشینه تحقیق داده کاوی توزیع شده پیشینه داخلی داده کاوی توزیع شده…

  • پاورپوینت کتاب كلیات علم اقتصاد از پژویان و کاشی

    پاورپوینت کتاب كلیات علم اقتصاد از پژویان و کاشی رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت کتاب كلیات علم اقتصاد از پژویان و کاشی جهت رشته ی حسابداری در قالب 250 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع…

  • پروتکل فراشناختی MCT طرح درمان افزایش عزت به نفس

    پروتکل فراشناختی MCT طرح درمان افزایش عزت به نفس کلمات کلیدی : دانلود پروتکل درمانی خرید پروتکل درمانی پکیج های درمانی روانشناسی پروتکل های درمانی در روانشناسی پروتکل درمانی عزت نفس پروتکل درمانی افزایش عزت نفس خرید پروتکل درمانی درمان…

  • پاورپوینت CT در کلیه ها

    پاورپوینت CT در کلیه ها رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت CT در کلیه ها جهت رشته ی پزشکی در قالب 24 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت ویرایش       اندیکاسیونهای…

  • فصل دوم پایان نامه و پیشینه نظری ریسک عملیاتی

    فصل دوم پایان نامه و پیشینه نظری ریسک عملیاتی کلمات کلیدی : فصل دوم پایان نامه ریسک عملیاتی مبانی نظری ریسک عملیاتی پیشینه تحقیق ریسک عملیاتی پیشینه داخلی ریسک عملیاتی پیشینه خارجی ریسک عملیاتی پیشینه پژوهش ریسک عملیاتی پیشینه نظری…

  • پرسشنامه مقیاس پرخاشگری آیزنگ و گلین ویلسون

    پرسشنامه مقیاس پرخاشگری آیزنگ و گلین ویلسون کلمات کلیدی : پرسشنامه پرخاشگری نوجوانان پرسشنامه پرخاشگری آیزنگ پرسشنامه پرخاشگری ایزنگ پرسشنامه برای پرخاشگری پرسشنامه سنجش پرخاشگری نوجوانان پرسشنامه پرخاشگری آیزنگ و ویلسون دانلود پرسشنامه پرخاشگری آیزنگ پرسشنامه پرخاشگری آیزنگ و گلین…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق نظریه های مشکلات رفتاری 43 صفحه

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق نظریه های مشکلات رفتاری 43 صفحه فصل دوم پایان نامه نظریه های مشکلات رفتاری مبانی نظری نظریه های مشکلات رفتاری پیشینه تحقیق نظریه های مشکلات رفتاری پیشینه پژوهش نظریه های مشکلات رفتاری پیشینه نظری نظریه…

  • مبانی نظری زیرساختهای مدیریت دانش 89 صفحه کامل و جامع

    مبانی نظری زیرساختهای مدیریت دانش 89 صفحه کامل و جامع کلمات کلیدی : مبانی نظری زیرساختهای مدیریت دانش دانلود مبانی نظری زیرساختهای مدیریت دانش پیشینه تحقیق زیرساختهای مدیریت دانش ادبیات نظری زیرساختهای مدیریت دانش فصل دوم پایان نامه زیرساختهای مدیریت…

  • پالایش خاک از عناصر سنگین با استفاده از قدرت جذب برگ و ریشه گیاه پالایی

    پالایش خاک از عناصر سنگین با استفاده از قدرت جذب برگ و ریشه گیاه پالایی کلمات کلیدی : پایان نامه گیاه پالایی گیاه پالایی در ایران گیاه پالایی فلزات سنگین آلودگی خاک با فلزات سنگین  گیاه پالایی خاکهای آلوده به…

  • مبانی نظری و پیشینه تحقیق نظریه های جامعه شناسی اخلاق 99 صفحه

    مبانی نظری و پیشینه تحقیق نظریه های جامعه شناسی اخلاق 99 صفحه کلمات کلیدی : مبانی نظری اخلاق پیشینه تحقیق اخلاق مبانی نظری نظریه های اخلاق پیشینه تحقیق نظریه های اخلاق مبانی نظری نظریه های جامعه شناسی اخلاق پیشینه تحقیق…

  • پاورپوینت داروهای کمکی در درمان ناراحتی های محرومیت از الکل

    پاورپوینت داروهای کمکی در درمان ناراحتی های محرومیت از الکل رفتن به سايت اصلي دانلود پاورپوینت درمان های دارویی الکل جهت رشته ی پزشکی در قالب 15 اسلاید و با فرمت pptx به صورت کامل و جامع و با قابلیت…

  • بررسی و مقایسه تطبیقی حد زنا در فقه امامیه و قانون مجازات اسلامی

    بررسی و مقایسه تطبیقی حد زنا در فقه امامیه و قانون مجازات اسلامی زنا در فقه امامیه مبانی حد زنا در فقه امامیه جایگاه حد زنا در قانون مجازات اسلامی راههای اثبات و مجازات زنا در فقه امامیه راههای اثبات…